高效液相色譜柱用于快速分離混合極性樣品,與C8或C18柱相比,疏水性較小,通??墒褂盟喑煞指叩南疵撘?。對(duì)非極性化合物表現(xiàn)了更短的保留時(shí)間,對(duì)極性化合物幾乎沒有明顯影響。高效液相色譜柱是以液體作為流動(dòng)相的一種色譜分析法,它亦是根據(jù)不同組分在流動(dòng)相和固定相之間的分配系數(shù)的差異來對(duì)混合物進(jìn)行分離的。氣相色譜中評(píng)價(jià)色譜柱柱效的方法及計(jì)算理論塔板數(shù)的公式同樣適合于高效液相色譜。
性能優(yōu)點(diǎn):
1、分離生物分子的理想選擇*封端;
2、高覆蓋率,*鍵合,球型硅膠載體,*封端中等的疏水性;
3、固定相的疏水性較?。环蛛x特性不同于ODS。
實(shí)驗(yàn)條件:
1、色譜柱1長15cm,內(nèi)徑4.6mm,裝填10um的C-18烷基鍵合固定相;
2、色譜柱2長15cm,內(nèi)徑4.6mm,裝填5um的C-18烷基鍵合固定相;
3、流動(dòng)相甲醇:水(85:15), 流量0.8ml/min;
4、紫外光度檢測(cè)器波長 254nm,靈敏度0.08;
5、進(jìn)樣量5μ1。
1、根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)錄像指導(dǎo),按KLC321儀器操作步驟將儀器調(diào)節(jié)至進(jìn)樣狀態(tài),待儀器流路及電路系統(tǒng)達(dá)到平衡,色譜工作站之“采樣系統(tǒng)”基線平直時(shí),即可進(jìn)樣;
2、吸取5μ1苯、萘、聯(lián)苯的甲醇溶液進(jìn)樣,并用色譜工作站記錄色譜數(shù)據(jù),同時(shí)記錄色譜數(shù)據(jù)文件名;
3、用色譜工作站之“數(shù)據(jù)處理”系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)文件并記錄所需數(shù)據(jù);
4、在儀器上測(cè)定色譜柱2的塔板數(shù),打印色譜圖并比較色譜柱柱效差異。
數(shù)據(jù)記錄及處理:
1、記錄實(shí)驗(yàn)條件。
a、色譜柱與固定相;
b、流動(dòng)相及其流量、柱前壓;
c、檢測(cè)器及其靈敏度;
d、進(jìn)樣量;
2、記錄色譜峰的保留時(shí)間tR和相應(yīng)色譜峰的半峰寬Y12。
3、分別計(jì)算苯、萘、聯(lián)苯在該色譜柱上的理論塔板數(shù)n和理論塔板高度。