液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體,又分為液-液色譜(LLC)及液-固色譜(LSC)?,F(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較,具有高效、快速、靈敏等特點。
液相色譜儀的用途:
1、在聚合物的分析中,吸附色譜一般用來分離添加劑,如偶氮染料、抗氧化劑、表面活性劑等,也可用于石油烴類的組成分析。
2、用于氨基酸、蛋白質(zhì)的分析,也適合于某些無機離子(NO3-、SO42-、Cl-等無機陰離子和Na+、Ca2+、Mg2+、K+等無機陽離子)的分離和分析,具有十分重要的作用。
3、適用于水溶液的體系,又適用于有機溶劑的體系。當(dāng)所用的洗脫劑為水溶液時,稱為凝膠過濾色譜,其在生物界的應(yīng)用比較多。
液相色譜儀的操作步驟:
1、準(zhǔn)備:
①準(zhǔn)備所需流動相,用合適的0.45濾膜過濾,超聲脫氣20min;
?、诟鶕?jù)待測樣品的需要更換合適的色譜柱(注意方向)和定量環(huán);
?、叟渲茦悠返臉?biāo)準(zhǔn)溶液,用合適的0.45um濾膜過濾;
?、軝z查儀器各部件是否連接正常,其中包括電源線、數(shù)據(jù)線、地線以及輸液管道。
2、開機:
①接通電源,一次打開檢測器、輸液泵,待檢測器自檢結(jié)束,顯示測量狀態(tài)時再打開電腦、打印機及電腦顯示器等;
?、诟鼡Q流動相并排氣泡;
?、蹖⒐苈返牟讳P鋼過濾頭放入裝有準(zhǔn)備好的流動相儲液瓶中;
?、苣鏁r針轉(zhuǎn)動泵的排空閥,約半圈,之后擰松排空閥;
?、莅摧斔捅茫╬urge)鍵,綠燈亮?xí)r開始以5.0ml/min流速沖洗約2分鐘,管路無氣泡時按下(stop)鍵,重新設(shè)定流速值。
3、設(shè)計參數(shù):
?、倭魉僭O(shè)定
?、诓ㄩL設(shè)定
③設(shè)定完成按運行(run)按鍵
?、苌V工作站操作:依次執(zhí)行→打開“在線工作站”→“通道1”→“OK”→“數(shù)據(jù)采集”后進(jìn)行零點校正、查看基線,確定基線穩(wěn)定后關(guān)閉查看基線可以進(jìn)樣。
進(jìn)樣后進(jìn)行采集、預(yù)覽、查看結(jié)果、打印
4、進(jìn)樣:
?、龠M(jìn)樣前將(A/Z)檢測器按鍵調(diào)零查看基數(shù)是否在0mv,有偏差則(零點校正)按鍵進(jìn)行調(diào)試
?、谟脴悠非逑醋⑸淦鳌⑴懦龤馀?、抽取適量后將手動進(jìn)樣閥桿調(diào)到位置,樣品注入進(jìn)樣閥后調(diào)到(Inject)位置,以此進(jìn)樣操作步驟完成,進(jìn)入在線工作站自動采集數(shù)據(jù)流程。
5、系統(tǒng)清洗:
由于分析樣品時流動相系統(tǒng)中含有緩沖鹽類物質(zhì),需使用10%甲醇水溶液,以1.0ml/min沖洗40分鐘后更換甲醇試劑,以同樣1.0ml/min沖洗40分鐘,停泵,關(guān)機。